桔黄赛多孢菌胞外胰蛋白酶的酶学特性

桔黄赛多孢菌Scedosporium aurantiacum是慢性肺病患者的常见呼吸道定植菌,在免疫缺陷人群中可引起侵袭性感染,致死率高,但由于致病机理不明,目前仍然缺乏有效的防控手段。我们在前期研究中,通过差异蛋白组学及酶工程技术发现分泌胰蛋白酶是桔黄赛多孢菌的潜在毒力因子,目前对这种蛋白酶的遗传信息、结构及致病机制并不清楚。本研究用Superdex S-200分子筛和DEAE-Sepharose离子交换两种填料将这种蛋白酶分离纯化出来,通过酶谱验证了纯化效果。进一步研究发现,这种胰蛋白酶对bFSR、bLSTR和bEKK 3种底物的水解性能最佳,对zFR和bzLR的水解性能最差。酶解最快的反应所对应的K_m为6.09μmol/L,V_max为13.01μmol/L/s,K_cat为23.65/s;酶解最慢的反应所对应的K_m为29.94μmol/L,V_max为11.35μmol/L/s,K_cat为20.63/s。研究结果对于填补赛多孢菌毒力因子研究的空白、针对毒力因子开发新型的抗真菌药物和治疗方法都具有重要意义。     

三阴性乳腺癌免疫微环境及免疫治疗研究进展

三阴性乳腺癌(TNBC)是一组高度异质性的恶性肿瘤,目前缺乏明确治疗靶点。随着TNBC基因组学、蛋白质基因组学、免疫微环境和免疫治疗研究取得突破性进展,人们更深入地认识了TNBC的生物学机制,推动TNBC转化医学研究与精准诊疗,但关于TNBC生物学特征及临床进程的许多科学问题仍亟待解决。现对TNBC分子分型、基因组学研究、免疫微环境及免疫治疗进展进行综述。     

男性不育患者解脲支原体感染状况及其对精液参数的影响

目的:观察男性不育患者解脲支原体UU感染状况及其对精液参数的影响,分析治疗前后精液参数的变化.方法:用培养法检测4300例男性不育患者精液UU感染情况并行精液常规检测,与正常对照组进行比较.对UU感染患者根据药敏结果进行治疗,并观察治疗前后精液参数的变化.结果:男性不育患者UU的感染率为39.3％,对照组为12.8％,差异有统计学意义(P＜0.05).男性不育UU阳性患者精子浓度、前向运动PR、正常形态率与同组阴性者比较差异无统计学意义(P＞0.05),与对照组阴性者比较,差异有统计学意义(P＜0.01),与对照组阳性者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).经治疗后患者精子浓度、前向运动、正常形态率有明显改善.结论:解脲支原体感染是引起男性不育的主要原因,对精子浓度、前向运动、正常形态率有一定的影响,经过合理治疗后精液质量可以改善.     

LPS／D—GalN诱发ⅣF—KB转基因小鼠急性致死性肝损伤模型的建立

目的以NF—KB转基因BALB／c小鼠建立一个LPS／D—GaIN诱发的急性致死性肝损伤模型。方法采取腹腔注射高剂量的LPS／D-GalN建立急性致死性肝损伤小鼠模型,观察模型小鼠的促炎症细胞因子水平和NF—KB的活性改变,以及肝脏功能和病理改变情况。结果模型组小鼠生存时间为8—10h,模型建立后小鼠血清TNF—a、IL-6和MCP-1水平显著升高,在2—4h达到高峰;肝脏外观出现瘀血和出血,肝脏小叶被严重破坏,肝细胞严重坏死和出血;血清ALT／AST水平在模型诱发后持续迅速上升;整体成像显示胛-KB的活性在4～6h达到高峰。正常对照组小鼠以上指标无显著变化。结论成功建立LPS／D-GalN诱发的M-船转基因小鼠的急性致死性肝损伤模型。     

全胸腔镜下肺叶切除联合系统淋巴清扫对肺癌患者血清疼痛相关因子和免疫功能的影响及预后的影响因素分析

摘要 目的：探讨全胸腔镜下肺叶切除（VATS）联合系统淋巴清扫对肺癌患者血清疼痛相关因子和免疫功能的影响,并分析预后的影响因素。方法：选择我院于2014年3月~2016年3月期间收治的肺癌患者116例,采用随机数字表法分为对照组和研究组,各58例。对照组患者给予传统开胸肺叶切除联合系统淋巴清扫治疗,研究组给予VATS联合系统淋巴清扫治疗,对比两组手术相关指标、血清疼痛相关因子和免疫功能,随访记录研究组患者5年生存率,分析预后的影响因素。结果：与对照组相比,研究组手术时间更长,术中出血量更少,术后住院时间、切口长度、引流时间更短（P<0.05）。两组术后1 d去甲肾上腺素（NE）、前列腺素E2（PGE2）、P物质（SP）、皮质醇（Cor）水平均较术前升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。两组术后1 d CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺均较术前降低,但研究组高于对照组,CD8+较术前升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。单因素分析结果可知：研究组患者的预后与组织分化、吸烟史、病灶直径、临床分期、清扫淋巴结个数有关（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果可知：临床分期、清扫淋巴结个数是研究组患者预后的影响因素（P<0.05）。结论：ATS联合系统淋巴清扫可减轻肺癌患者术后疼痛及免疫抑制,虽然手术时间更长,但可以改善其他围术期指标。此外,临床分期、清扫淋巴结个数是患者预后的影响因素,应引起临床重视。     

人脐带间充质干细胞重复静脉注射动物毒性试验

摘要 目的：评价多次尾静脉注射脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对小鼠的体内毒性作用。方法：48只健康ICR小鼠,按性别和体重随机分为4组（即对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组）。小鼠通过微静脉注射不同剂量hUC-MSCs悬浮液,间隔3天给药1次,共给药4次。记录小鼠摄食量、体重、体温,给药结束后恢复两周后牺牲动物作大体解剖,检查各个器官器质性病变;利用流式细胞仪分别检测CD3、CD4、CD8阳性细胞亚群数量;ELISA试剂盒检测血清IgM、IgG、C3、C4指标;对肺脏、脾脏、肾脏行组织病理学检查。结果：实验组与对照组相比较,注射不同剂量干细胞后一般观察、体重、体温、摄食量、IgM以及C3在给药期和恢复期均未发生显著变化。在恢复期,注射中、高剂量hUC-MSCs组血清IgG和C4水平略有降低,但未达到显著水平P<0.05;CD4阳性T细胞集群数量以及CD4/CD8系数在hUC-MSCs中、高剂量组显著上升（P<0.05）。大体剖检,除脾脏相比溶媒对照组略显增大外其它各器官均未发现肉眼可见明显异常;称重后发现hUC-MSCs高剂量组脾重量与溶媒对照组相比显著升高（P<0.05）。脾脏、肺脏、肾脏病理学检测未见明显异常。结论：健康ICR小鼠尾静脉注射临床剂量hUC-MSCs（1×10⁶ cells/kg）可能调动动物免疫反应,此外,未观察到hUC-MSCs对小鼠有明显毒副作用。     

2型糖尿病合并急性脑梗死TCD微栓子监测及炎性因子检测的意义

目的探讨TCD微栓子（MEs）监测及超敏C反应蛋白和白介素-6检测在2型糖尿病合并急性脑梗死发病中的意义。方法序贯收集2011年1月至2012年6月在我院神经内科住院的首次前循环脑梗死患者90例,根据是否合并2型糖尿病分为糖尿病合并脑梗死组（观察组）45例,单纯急性脑梗死组45例（脑梗死组）,另外,随机收集同期我院内分泌科首次住院的单纯2型糖尿病患者45例（糖尿病组）,监测三组患者病灶侧大脑中动脉（MCA）微栓子阳性率及微栓子数目,血清超敏c反应蛋白及白介素-6值,分析三组患者中微栓子及相关炎性因子检测的意义。结果观察组脑血管微栓子监测数量和Hs—CRP血清检测水平较脑梗死组和糖尿病组均显著增高（P〈O．05和P〈0．01）。观察组和脑梗死组血清白介素-6检测水平与糖尿病组相比显著增高（P〈0．05）,但观察组与脑梗死组相比无统计学意义（P〉0．05）。结论糖尿病合并急性脑梗死患者微栓子数目和血清Hs—CRP、白介素-6水平明显增高,提示糖尿病脑梗死患者血管内炎性斑块不稳定程度增加,再发卒中的风险明显增高。     

桔黄赛多孢霉外泌弹性蛋白酶的生化特性

外泌弹性蛋白酶是桔黄赛多孢霉(Scedosporium aurantiacum)主要毒性蛋白酶之一,本文在前期研究的基础上,对这种蛋白酶的序列、结构和酶学特性进行了研究。首先通过柱层析技术将S. aurantiacum培养上清液中的蛋白进行了分离,然后通过酶谱电泳纯化得到了弹性蛋白酶条带。从凝胶中提取了弹性蛋白酶,通过质谱技术对其序列进行了检测,并对其反应特性、活力和反应动力学参数进行了研究。结果显示,S. aurantiacum外泌弹性蛋白酶对弹性蛋白和牛跟腱胶原蛋白(bovine achilles tendon collagen, BATC)具有较好的水解性能,对鱼皮胶原蛋白(fish skin collagen, FSC)的水解效率高于对鱼鳞明胶的水解效率,对酪蛋白的水解性最差。作用于弹性蛋白时,其催化效率小于猪胰腺弹性蛋白酶。Zn²⁺对酶活力有提升作用,而Ca²⁺、Mg²⁺、Na⁺、(2S)-2-[(4S)-2-氨基-1,4,5,6-四羟基4-嘧啶基]-N-[[[(1S)-1-羰基-3-甲基丁基]氨基]羰基]甘氨酰- N1-[(1S)-1-甲基-2-氧乙基]-l-谷氨酸甲酰胺(elastatinal)和苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride, PMSF)均对酶活有抑制作用。该蛋白酶和青霉(Paecilomyces lilacinus)外泌丝氨酸蛋白酶(PDB Entry: c3f7oB_)的序列最相似,且有多段保守序列的氨基酸个数多于7个,可以作为PCR反应引物设计的模板。酶学特性实验表明,S. aurantiacum外泌弹性蛋白酶对肺组织中的弹性蛋白具有降解作用,其蛋白表达和毒性机制需要进一步的研究。     

参芪活血方对心气虚细胞模型β1受体、ET和NOS基因表达的作用

为了探讨参芪活血方对心气虚细胞模型β1受体、ET和NOS基因表达的干预作用.采取培养心肌细胞缺氧再给氧损伤的方法建立心气虚细胞模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测β1受体、ET和NOS基因表达情况.研究结果表明,各中药组与模型组β1受体、ET和NOS mRNA表达有显著性差异(P＜0.01);活血方组与其他中药组的β1受体、ET和NOS mRNA表达情况有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05).参芪活血方防治心气虚证的机制与其干预β1受体、ET和NOS mRNA表达有关.     

HO-1在缺血后处理抗肺缺血再灌注损伤中的作用及其对STAT-3表达的影响

目的研究血红素加氧酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)在缺血后处理(ischemic postconditioning,IPO)抗肺缺血再灌注损伤中的作用机制及其对STAT-3蛋白表达的影响。方法 40只SD雄性大鼠(250-280 g)随机分为假手术组(S)、缺血再灌注组(IR)、缺血后处理组(IPO)及缺血后处理+HO-1抑制剂组(IPO+ZnPP)。称重法计算缺血肺组织干/湿比(W/D),试剂盒检测缺血肺组织MDA水平及MPO与HO-1活性,Western Blot检测HO-1,p-STAT-3蛋白表达水平。结果与S组比较,IR组大鼠W/D、MDA、MPO、HO-1活性及蛋白表达水平均显著增加,而p-STAT-3蛋白表达水平显著降低,IPO可以逆转上述变化,而HO-1特异性抑制剂可以消除IPO对上述指标的影响。结论 IPO可以通过促进HO-1活性及蛋白表达的增加从而激活STAT-3信号通路而发挥抗肺缺血再灌注损伤作用。